Electroforesis horizontal y vertical: Diferencias

julio 21, 2021by Kalstein
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La electroforesis en gel es una técnica de laboratorio utilizada en genética para separar mezclas que contienen ADN, ARN y otras proteínas de acuerdo con su respectiva carga y tamaño molecular. El ADN, el ARN o las proteínas que deben separarse en este método se ejecutan a través de un gel que contiene pequeños poros. Las moléculas son conducidas a través del gel por un campo eléctrico.

Electroforesis horizontal en gel

La electroforesis horizontal en gel utiliza la teoría básica para la separación de moléculas de ADN, ARN o proteínas según su respectivo tamaño molecular y carga. En esta técnica, el gel está presente en una orientación horizontal y se sumerge en un tampón que es continuo. El gel de agarosa se utiliza para separar la caja de gel en dos compartimentos. Un extremo de la caja de gel contiene un ánodo, mientras que el otro extremo contiene un cátodo. Cuando se aplica una corriente, el búfer utilizado en esta técnica permite la creación de un gradiente de carga. Cuando se aplica la carga, el gel tiende a calentarse.

El tampón también funciona como refrigerante, que mantiene la temperatura en niveles óptimos. La recirculación del tampón en ejecución evita la formación de un gradiente de pH. No se puede utilizar un sistema de tampón discontinuo en la electroforesis horizontal en gel ya que los dos compartimentos del sistema de gel se conectan con el tampón de funcionamiento.

En la electroforesis horizontal en gel, la acrilamida no puede utilizarse ya que la caja de gel está expuesta al oxígeno. Debido a la presencia de oxígeno, se inhibe la polimerización de la acrilamida, lo que interfiere con la formación del gel. La electroforesis horizontal en gel es un método sin esfuerzo que se utiliza en la separación de ADN y ARN.

Electroforesis vertical en gel

La técnica de electroforesis en gel vertical funciona de acuerdo con la teoría primaria de la electroforesis en gel, pero se considera que es más compleja que el método de electroforesis en gel horizontal. Esta técnica utiliza un tampón discontinuo. Un cátodo está ubicado en la cámara superior, y el ánodo está ubicado en la cámara inferior. Los electrodos presentes en cada compartimento proporcionan el campo eléctrico requerido. Una capa delgada de gel se vierte entre las dos placas de vidrio montadas. Por lo tanto, la parte superior del gel se sumerge en la cámara superior, y la parte inferior del gel se sumerge en la cámara de la parte inferior. Una vez que se aplica la corriente, una pequeña porción del tampón se mueve a la cámara inferior desde la cámara superior a través del gel.

En la electroforesis en gel vertical, el tampón solo fluye a través del gel. Esto permite un control preciso del gradiente de voltaje durante la etapa de separación. Puede utilizarse gel de acrilamida ya que los compartimentos no están expuestos al oxígeno atmosférico. Debido al tamaño de poro más pequeño del gel de acrilamida, se puede lograr una separación precisa con una resolución más alta.

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